前蛋白转化酶枯草溶菌素9影响人单核细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的机制

廖付军; 鲍海龙; 龚才伟; 刘大男

doi:10.12307/2026.623

摘要：背景:人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)作为胆固醇代谢的重要调节因子,通过与低密度脂蛋白受体结合促进低密度脂蛋白受体降解,从而影响胆固醇的摄取和血脂水平.而胆固醇通过ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和清道夫受体BI(SR-BI)等转运蛋白进行外流,转运驱动蛋白结合蛋白2(TRAK2)作为衔接蛋白可能在此过程中发挥作用.因此,探讨PCSK9是否通过TRAK2/ABCA1途径调节胆固醇外流,为理解PCSK9在动脉粥样硬化中的作用提供新视角和理论依据. 目的:探讨PCSK9对人单核细胞源性巨噬细胞胆固醇流出的影响及机制. 方法:取THP-1细胞离心后加入佛波酯培养48 h诱导分化为THP-1源性巨噬细胞,再用含氧化型低密度脂蛋白的无血清培养基孵育24 h诱导泡沫细胞形成.①将泡沫细胞分为4组:对照组、PCSK9蛋白组、阴性对照组(非靶向siRNA转染泡沫细胞)、PCSK9 siRNA转染组,RT-qPCR和Western blot检测TRAK2、ABCA1、ABCG1、SR-BI mRNA和蛋白表达;②将泡沫细胞分为3组:阴性对照组、TRAK2 siRNA转染组、(TRAK2+PCSK9)siRNA共转染组,RT-qPCR和Western blot检测ABCA1 mRNA和蛋白表达;③将泡沫细胞分为8组:对照组,PCSK9蛋白组、PCSK9 siRNA转染组、TRAK2 siRNA转染组、ABCA1 siRNA转染组、(TRAK2+PCSK9)siRNA共转染组、(PCSK9+ABCA1)siRNA共转染组、(TRAK2+ABCA1)siRNA共转染组,采用25-NBD-胆固醇分析泡沫细胞胆固醇流出率. 结果与结论:①PCSK9蛋白组TRAK2 mRNA和蛋白表达高于对照组(P<0.05),ABCA1、ABCG1、SR-BI mRNA和蛋白表达相对于对照组无显著统计学差异;PCSK9 siRNA转染组TRAK2 mRNA和蛋白表达低于阴性对照组(P<0.001和 P<0.05),ABCA1 mRNA和蛋白表达高于阴性对照组(P<0.001),ABCG1、SR-BI mRNA和蛋白表达相对于阴性对照组无显著统计学差异;②TRAK2 siRNA转染组ABCA1 mRNA和蛋白表达高于阴性对照组(P<0.001和P<0.05),(TRAK2+PCSK9)siRNA组ABCA1 mRNA和蛋白表达高于阴性对照组(P<0.001和P<0.05),(TRAK2+PCSK9)siRNA组相比于TRAK2 siRNA组ABCA1 mRNA和蛋白表达均无显著统计学差异;③PCSK9蛋白组相比于对照组胆固醇外流无显著统计学差异;PCSK9 siRNA、TRAK2 siRNA和(PCSK9+TRAK2)siRNA组胆固醇外流均高于对照组(P<0.001),组间胆固醇外流无显著统计学差异;ABCA1 siRNA组胆固醇外流低于对照组(P<0.001);(PCSK9+ABCA1)siRNA组胆固醇外流低于PCSK9 siRNA组(P<0.001),(TRAK2+ABCA1)siRNA组胆固醇外流低于TRAK2 siRNA组(P<0.001).结果表明,PCSK9可能通过TRAK2/ABCA1途径调节胆固醇流出.