针刺调控脑出血模型大鼠自噬过程的作用与机制

季德江; 张晓静; 冶尕西

doi:10.12307/2026.705

摘要：背景:研究发现,细胞自噬是治疗脑出血的重要靶点.针刺通过调控神经元凋亡、焦亡、自噬等改善脑血流,减轻炎症反应,促进神经再生,对脑出血引起的受损神经有保护作用. 目的:探究针刺"百会透悬厘"对脑出血引起的大鼠自噬反应及大鼠神经功能恢复的潜在机制. 方法:将63只符合标准的雄性SD大鼠随机分成7组.①除假手术组外,其余6组大鼠注射自体血制备脑出血模型(模型组);②模型+针刺组:在造模后第2天开始针刺百会、悬厘穴,2次/d;③模型+3-甲基腺嘌呤组:在造模前15 min侧脑室注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤;④模型+3-甲基腺嘌呤+针刺组:在模型+3-甲基腺嘌呤组基础上,同针刺组处理;⑤模型+雷帕霉素组:造模前15 min向侧脑室注射自噬激动剂雷帕霉素;⑥模型+雷帕霉素+针刺组:在模型+雷帕霉素组基础上,同针刺组处理.分别于针刺第1,3,7天,通过Longa评分判断大鼠神经功能缺损情况;苏木精-伊红染色观察大鼠脑组织病理变化;免疫组化检测自噬蛋白LC3表达;RT-qPCR检测自噬基因表达;Western Blot检测大鼠脑组织中相关蛋白表达. 结果与结论:①Longa评分结果显示,针刺会降低脑出血引起的大鼠神经损伤;②假手术组大鼠脑组织各层结构清晰,细胞排列规则;模型组炎症细胞及小胶质细胞浸润;随着时间增加,针刺组炎性损伤及细胞肿胀降低;模型+3-甲基腺嘌呤组炎症细胞浸润增加,小胶质细胞游离增生;模型+3-甲基腺嘌呤+针刺组和雷帕霉素组炎症细胞浸润逐渐减少,神经元细胞逐渐排列整齐;模型+雷帕霉素+针刺组炎症细胞浸润减少,神经元正常,排列规则;③在针刺第7天,与假手术组相比,模型组LC3表达显著升高(P<0.05),p62表达显著降低(P<0.05),p-mTOR和p-p70S6K表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,模型+针刺组LC3表达显著升高,p62、p-mTOR和p-p70S6K表达显著降低(P<0.05);与模型+3-甲基腺嘌呤组比较,模型+3-甲基腺嘌呤+针刺组LC3表达显著升高,p62、p-mTOR和p-p70S6K表达显著降低(P<0.05);与模型+雷帕霉素组比较,模型+雷帕霉素+针刺组LC3表达显著降低(P<0.05),p62表达显著升高(P<0.05),p-mTOR和p-p70S6K差异无显著性意义(P>0.05);④以上结果表明,针刺"百会透悬厘"对脑出血大鼠神经功能恢复具有促进作用,针刺通过激活mTOR/p70S6K信号通路促进自噬发生.