假单胞菌产弹性蛋白酶基因的克隆与表达
高兆建
王东星
王红建
苗倩钦
1.徐州工程学院,江苏徐州,2210082.徐州工程学院,江苏徐州,2210083.徐州工程学院,江苏徐州,2210084.徐州工程学院,江苏徐州,221008
摘要：从假单胞菌(Pseudomonas sp.)XZG36中克隆弹性蛋白酶基因,构建原核表达载体,实现其在大肠杆菌(Escherichia coli)中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为微生物发酵生产弹性蛋白酶奠定基础.以假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增弹性蛋白酶基因,并将其开放阅读框(ORF)克隆至融合表达载体pET30a(+)进一步IPTG诱导表达;表达产物经His·Bind亲和层析纯化后对弹性蛋白酶进行酶学性质分析.实验成功克隆了弹性蛋白酶基因,DNA基因片段为1672 bp、编码497个氨基酸残基的多肽,与预计长度相符合;实现了其在E.coli中的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的20％;经SDS-PAGE分析,相对分子质量为48 000,与预期的一致;提纯后的表达蛋白SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92 ％以上.表达蛋白具有良好活性.
关键词：弹性蛋白酶基因克隆表达分析
分类号：Q556(酶)Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：江苏省苏北科技发展计划项目(BC2013417)徐州市科技计划项目(XF12C005)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 31-35 )
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