水蛭素对缺氧诱导心脏微血管内皮细胞间质转分化的作用及机制研究
刘依1
尹玉洁2
韩宁馨1
贾振华3
1.050017 石家庄,河北医科大学研究生学院2.石家庄,络病研究与创新中药国家重点实验室;石家庄,国家中医药管理局重点研究室(心脑血管络病);石家庄,河北省中西医结合医药研究院3.050017 石家庄,河北医科大学研究生学院;石家庄,络病研究与创新中药国家重点实验室;石家庄,国家中医药管理局重点研究室(心脑血管络病);石家庄,河北省中西医结合医药研究院
摘要：目的 探讨通络药物水蛭素对缺氧诱导的人心脏微血管内皮细胞(HCMECs)间质转分化(EndMT)的作用及可能机制.方法 取常规培养的HCMECs细胞,随机分为对照组、缺氧组、水蛭素组(包括0、20、40、80、100 μg/ml 5个浓度).对照组常规培养不做任何处理,缺氧组置入低氧培养箱72 h,水蛭素组预加入Hirudin工作液,4 h后置入低氧培养箱72 h.MTS比色法检测HCMECs增殖能力;倒置显微镜观察HCMECs形态;免疫荧光鉴定HCMECs间质转分化情况,Western-blot检测内皮间质转分化相关蛋白:包括内皮细胞标记血小板—内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin),间质细胞标记α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1),以及低氧诱导因子1α(HIF-1α)、转化生长因子β1(TGF-β,)、Smad同源物2/3(Smad2/3)、锌指转录因子(snail)等相关信号通路的蛋白表达.结果 MTS法检测显示,缺氧显著抑制细胞活性(P＜0.01),水蛭素在20～100 μg/ml浓度范围内可提高细胞活性,且呈现浓度依赖性,当浓度为100μg/ml时细胞活性最强(P＜0.01).各组细胞培养72 h后,倒置显微镜下观察发现:对照组细胞呈铺路石样或鹅卵石状结构,缺氧组细胞由鹅卵石状结构变为分散的长梭形,接近成纤维细胞形态,水蛭素组长梭形细胞形态明显改善,细胞恢复鹅卵石样.Western-blot与免疫荧光结果显示:与对照组比较,缺氧组CD31、VE-cadherin蛋白水平降低(P＜0.01),且vWF表达减少,α-SMA、FSP-1蛋白水平升高(P＜0.01),且vimentin表达增强;与缺氧组比较,水蛭素明显增加CD31、VE-cadherin蛋白表达(P＜0.01),并增强vWF表达,下调α-SMA、FSP-1蛋白表达(P＜0.01),并减弱vimentin表达;与对照组相比,缺氧组信号通路HIF-1α、TGF-β1、p-smad2/3、snail蛋白表达均升高(P＜0.01),与缺氧组比较,水蛭素下调HIF-1α、TGF-β,、p-smad2/3、snail蛋白表达(P＜0.01).结论 水蛭素可以改善缺氧诱导的HCMECs细胞发生EndMT,其机制可能与调控 HIF-α/TGF-β1/smad/snail 通路有关.
关键词：水蛭素缺氧人心脏微血管内皮细胞内皮间质转分化信号通路作用机制
分类号：R285.5(中药学)
论文发表日期：2024-09-18
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1120-1126 )
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