小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的克隆与表达
黄红艳1
柳天平2
孙强3
张蓉4
陈萍3
周鹏3
王冀姝3
李荣3
韩骅3
1.第四军医大学生理学教研室,陕西,西安7100322.石家庄国际和平医院检验科,河北,石家庄,5100003.第四军医大学遗传学与发育生物学教研室,陕西,西安7100324.第四军医大学口腔医学院,陕西,西安710032
摘要：目的:克隆小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因,并进行原核表达及蛋白纯化,为制备mNotch1的单克隆抗体做准备.方法:计算机分析小鼠Notch1全长,PCR扩增其胞外段高抗原区编码基因,克隆入载体T-vector进行序列测定,然后将测定正确的片段连入GST融合表达载体pGEX-4T-1,得到pG-NEF,转化宿主菌DH5α,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,以及新生条带表达形式分析以后,用GST亲和层析柱纯化.结果:小鼠Notch1分子胞外段近膜处约170个氨基酸区域抗原性较高,PCR扩增得到大小约500bp的特异性片段,序列测定结果与文献报导的完全一致;原核表达产物大小约Mr 43×103,以包涵体形式存在,约占总蛋白的25%,纯化后目的蛋白含量>95%.结论:成功地进行了小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的基因克隆、原核表达及蛋白纯化.
关键词：Notch1基因克隆原核表达蛋白纯化
分类号：R780.2(口腔病理学)
论文发表日期：2002-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 145-148 )
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