ADAM28基因原核表达载体的构建和在大肠杆菌中的融合表达
赵征
文玲英
金岩
轩东英
轩昆
1.第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,7100322.第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,7100323.第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,7100324.第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,7100325.第四军医大学口腔医学院,陕西,西安,710032
摘要：目的:利用消减杂交技术克隆出牙齿发育相关基因ADAM28.方法:本研究为构建AD-AM28基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导其表达并纯化出ADAM28蛋白;采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出ADAM28基因的蛋白编码序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中产生pMD18-T-AD-AM28,再经双酶切得到ADAM28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-AD-AM28;在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,并经SDS-PAGE电泳初步纯化.结果:①成功构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28,并经酶切鉴定、PCR鉴定和测序验证显示插入的ADAM28序列正确,阅读框架完整,未发现突变.②得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白.经IPTG诱导后出现一条约35.3×103的新蛋白带.结论:ADAM28基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达并纯化,为进一步研究该蛋白质的功能打下基础.
关键词：ADAM28基因原核表达载体融合蛋白
分类号：Q344.11(遗传学分支学科)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 246-250 )
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