强力霉素调控的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced成釉细胞株的建立
李东亮1
梁广智1
何永云1
刘晓影1
孙岩1
张娟娟1
李武修2
高玉光1
1.潍坊医学院口腔医学院,山东潍坊,2610422.山东科技大学,山东青岛,266510
摘要：目的:建立可受强力霉素调控的高表达外源基因的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced细胞株,用于基因功能的研究.方法:将质粒pTet-on Advanced转染至成釉细胞系(ALC),用1 000μg/mL的G418筛选抗性克隆.用RT-PCR进行DNA的整合鉴定,并瞬时转染荧光素报告基因(pTRE-Tight-Luc)对pTet-on Advanced阳性克隆株的功能进行鉴定.结果:G418压力筛选后,获得了13个细胞克隆株,RT-PCR检测均表达反义四环素转录激活子(rtTA Advanced),PCR产物测序结果与pTet-on Advanced基因序列一致,表明pTet-on Advanced基因片段已整合进小鼠成釉细胞基因组DNA,荧光素报告基因功能鉴定获得1株诱导表达倍率为22.1的克隆株,且pTet-on Advanced基因阳性的成釉细胞株的形态和生长度与正常成釉细胞没有明显差异.结论:通过脂质体转染的方法成功地获得1株诱导表达倍率为22.1的高表达成釉细胞株,为进一步研究EMPs在成釉细胞中功能打下了基础.
关键词：转染诱导表达tet-on Advanced系统成釉细胞系
分类号：R780.1(口腔疾病的预防与口腔卫生)
资助基金：国家自然科学基金(30672316)教育厅重点项目(J06122)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-5 )
英文信息