变异链球菌乳酸脱氢酶与霍乱毒素B亚单位嵌合表达质粒的构建和表达
张燕1
刘建国2
陈筑2
马欣荣3
唐琳2
吴家媛2
张剑2
管晓燕2
1.遵义医学院附属口腔医院,贵州遵义563003;滨州医学院附属医院口腔内科,山东滨州2566032.遵义医学院附属口腔医院,贵州遵义,5630033.中国科学院成都分院生物研究所,四川成都,610041
摘要：目的:构建含变异链球菌乳酸脱氢酶(LDH)和霍乱毒素B亚单位(CTB)嵌合原核表达质粒,并诱导表达融合蛋白.方法:应用PCR技术扩增LDH编码基因ldh和CT编码基因ctxB,定向克隆至原核表达质粒pET32a(+)上,通过限制性内酶切、PCR和序列测定分析鉴定后转化大肠杆菌BL21( DE3),并经IPTG诱导表达融合蛋白.结果:PCR扩增得到了ldh和ctxB;构建的质粒pET-LDH/CTB经Kpn I、Xho I双酶切和目的基因PCR检测,均得到1.4 kb大小的片段,与预计目的基因片段大小相同；质粒pET-LDH/CTB中插入的ldh序列与GeneBank中Idh比较同源性为98％,ctxB的同源性达99％,插入的相位正确；经IPTG诱导表达了约70×103的蛋白.结论:成功构建了变异链球菌LDH和CTB嵌合表达质粒pET-LDH/CTB,并正确表达融合蛋白.
关键词：变异链球菌乳酸脱氢酶霍乱毒素B亚单位原核表达质粒
分类号：R780.2(口腔病理学)
资助基金：国家自然科学基金(30160086)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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