pEGFP-N1-hIL-1Ra真核表达质粒的构建及其在兔软骨细胞中的稳定表达
赵雪1
叶程2
1.江汉大学医学与生命科学院,湖北武汉,4300562.湖北省中医院放射科,湖北武汉,430061
摘要：目的 构建含绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra,稳定转染兔软骨细胞后检测其表达.方法 通过RT-PCR扩增hIL-1Ra基因,并在两端添加HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点.将pEGFP-N1载体经BamH Ⅰ酶切后电泳鉴定,利用定向克隆技术将经Hind Ⅲ和BamHⅠ双酶切后的hIL-1Ra基因片段和pEGFP-N1载体经T4连接酶进行连接.重组的pEGFP-N1-hIL-1Ra在大肠杆菌DH5α感受态细胞内扩增,经过酶切电泳鉴定和DNA测序证明质粒构建是否成功.将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1Ra重组质粒DNA由脂质体介导转染兔软骨细胞,RT-PCR检测基因的表达,western-blot检测蛋白的表达.结果 通过对重组质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra构建成功,开放阅读框架正确.稳定转染兔软骨细胞后,RT-PCR得到目的 基因片段,ELISA检测到目的 蛋白的表达.结论 利用DNA重组技术能成功将hIL-1Ra基因克隆人pEGFP-N1载体中,构建出真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra,并获得了稳定表达目的 IL-1Ra的兔软骨细胞系,为骨关节炎的基因治疗研究奠定了实验基础.
关键词：骨关节炎pEGFP-N1-hIL-1Ra质粒基因治疗
分类号：R68(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 257-260,263 )
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