森林脑炎病毒包膜糖蛋白胞外区的表达、纯化及免疫原性分析
陈洋1
张剑1
陈华2
薛潘1
武福星1
袁明城1
袁若栋1
董阳超1
叶伟1
叶传涛3
雷迎峰1
1.空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室,陕西西安7100322.空军军医大学唐都医院妇产科,陕西西安7100383.空军军医大学唐都医院传染科,陕西西安710038
摘要：目的 构建森林脑炎病毒(TBEV)森张株包膜糖蛋白E胞外区的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中诱导表达、纯化及初步分析其免疫原性.方法 从GenBank下载TBEV森张株E蛋白胞外区基因序列(Eecto),密码子优化后交由公司合成,通过双酶切的方法克隆至pET28a载体,获得重组质粒pET28a-TBEV-Eecto.经过酶切和测序分析后,将正确的重组质粒转化BL21(DE3)感受态,用1 mmol/L异丙基-β-D-硫化半乳糖苷诱导表达后通过SDS-PAGE分析重组E蛋白胞外区的表达形式.纯化的包涵体用6 mol/L盐酸胍进行变性溶解,用含有非表面活性剂NDSB-201的缓冲液进行复性,之后超滤浓缩、镍柱亲和层析纯化及蛋白印迹鉴定.将获得的纯化TBEV-Eecto蛋白免疫BALB/c小鼠,利用免疫血清进行蛋白印迹、免疫荧光实验分析其特异性.结果 重组质粒pET28a-TBEV-Eecto经酶切后的片段与预期大小一致,测序分析正确.重组蛋白TBEV-Eecto主要以包涵体形式表达,经过盐酸胍变性溶解、NDSB-201复性、超滤及镍柱亲和纯化后获得纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blotting分析均显示其与预期大小一致.纯化的TBEV-Eecto蛋白免疫小鼠血清可特异性识别真核表达的TBEV-PrME蛋白,提示TBEV-Eecto具有良好的免疫原性.结论 成功构建TBEV森张株E蛋白胞外区的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达.纯化的TBEV-Eecto蛋白具有较好的免疫原性,为森林脑炎的血清学诊断方法和亚单位疫苗研制提供了基础.
关键词：森林脑炎病毒包膜蛋白胞外区原核表达免疫原性
分类号：R373.31(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：陕西省重点研发计划项目(2021ZDLSF01-05)空军军医大学军事医学珠峰工程人才计划项目(zfrclyf)
论文发表日期：2023-06-28
在线出版日期：2026-08-26（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 536-540 )
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