新型冠状病毒结构蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
王玉玲
金伯泉
李娜
田莹
董芸
李琦
马樱
庄然
空军军医大学基础医学院免疫学教研室,陕西西安710032
摘要：目的 制备针对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S蛋白)S1亚基、核衣壳蛋白(N蛋白)的小鼠源性单克隆抗体(mAbs),进行功能和应用的初步鉴定.制备具备中和活性的高亲和力人鼠嵌合抗体.方法 用重组表达的SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基和N蛋白分别免疫BALB/c小鼠,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗S蛋白S1亚基mAbs和抗N蛋白mAbs,并鉴定其在Western blotting、免疫组织化学染色中的应用价值;建立检测可溶性S蛋白和N蛋白的夹心ELISA方法;基于假病毒-荧光素酶检测系统,检测特异性抗体的中和活性.将分泌具备中和活性抗S蛋白S1亚基mAbs的杂交瘤细胞株测序,制备人鼠嵌合抗体.结果 获得53株分泌小鼠抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基mAbs的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名XA326.1～XA326.53;获得42株分泌小鼠抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名XA327.1～XA327.42.初步鉴定出9株可用于Western blotting 检测可溶性 SARS-CoV-2 S 蛋白 S1 亚基的 mAbs、8 株可用于 Western blotting 检测可溶性SARS-CoV-2 N蛋白的mAbs;9株可用于免疫组织化学染色的抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基mAbs、4株可用于免疫组织化学染色的抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs.构建以mAb XA326.7为包被抗体、生物素标记的mAb XA326.19为检测抗体的检测可溶性SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基的夹心ELISA试剂盒;采用mAb XA327.37作为包被抗体、生物素标记的mAbXA327.25为检测抗体,可以建立检测可溶性SARS-CoV-2 N蛋白的夹心ELISA试剂盒.XA326.4、XA326.7、XA326.8、XA326.49 mAbs具有中和活性,可以在假病毒感染实验中阻断病毒对人ACE2阳性细胞的感染.结论 成功制备出一套小鼠抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基、N蛋白的mAbs,可用于多种免疫学检测技术,XA326.4、XA326.7、XA326.8、XA326.49中和活性抗体具有潜在的临床应用价值.
关键词：新型冠状病毒刺突蛋白核衣壳蛋白单克隆抗体中和抗体免疫学检测方法
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(81871258)空军军医大学军事医学提升计划项目(2020SWAQ02)
论文发表日期：2023-07-28
在线出版日期：2026-08-26（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 595-601 )
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