RPA-毛细管电泳检测人腺病毒55型的方法建立及初步应用
袁若栋1
董阳超2
武福星1
段甜3
薛潘3
张剑2
袁明城2
薛智丰3
张海军2
张欠欠3
雷迎峰2
高小朋3
1.延安大学生命科学学院,陕西延安 716000;空军军医大学基础医学院病原生物学与微生物学教研室,陕西西安 7100322.空军军医大学基础医学院病原生物学与微生物学教研室,陕西西安 7100323.延安大学生命科学学院,陕西延安 716000
摘要：目的 建立重组酶聚合酶扩增(RPA)技术联合毛细管电泳快速检测人腺病毒55型(HAdV55)的方法及初步应用.方法 构建HAdV55-Hexon质粒作为扩增模板,针对HAdV55保守区Hexon基因序列设计RPA特异性引物,对引物筛选和优化,并建立RPA扩增及联合毛细管电泳检测体系,进行了特异性、灵敏度、可靠性评价;对18份临床样本进行RPA-毛细管电泳检测.结果 构建了含有HAdV55-Hexon全长基因的质粒,获得一对扩增效率最高的RPA引物;HAdV55的RPA-毛细管电泳检测体系最低检出限为2.9 × 103 copies/mL,整个过程30 min即可完成,冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-HKU1)、甲型乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒标准品提取物用该体系检测时均为阴性,且检测常见的人腺病毒类型(HAdV3、HAdV4、HAdV7、HAdV16、HAdV21)时也均为阴性,可认为对HAdV55有较强的特异性检测;建立的RPA-毛细管电泳检测能够有效地检测出临床患者咽拭子中的HAdV55.结论 RPA联合毛细管电泳检测HAdV55方法的建立为其临床诊断提供了良好的基础.
关键词：人腺病毒55型重组酶聚合酶扩增毛细管电泳
分类号：R440(诊断学)
资助基金：陕西省重点研发计划项目(2021ZDLSF01-05)
论文发表日期：2024-01-28
在线出版日期：2026-08-26（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 66-72 )
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