构建治疗非酒精性脂肪性肝病的TREM2慢病毒载体
魏莉
邵思佳
苟恺琳
高春辰
秦鸿雁
空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室,陕西西安 710032
摘要：目的 构建TREM2不同截断体的慢病毒治疗载体,观察其在体外非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)条件下对AML12肝细胞的影响,为后续靶向巨噬细胞的治疗奠定理论基础.方法 通过慢病毒包装的方式建立TREM2或可溶性TREM2(sTREM2)稳定转染AML12肝细胞系,利用qRT-PCR技术、Western blotting技术、流式细胞术检测转染效率,利用免疫荧光染色技术检测TREM2或sTREM2的表达和细胞定位;利用流式细胞术检测TREM2或sTREM2对体外NAFLD条件下细胞凋亡的影响和对静息态下细胞周期的影响;利用油红O染色观察脂质沉积变化情况.结果 与对照组相比,稳定转染细胞系中TREM2和sTREM2 mRNA水平明显升高,蛋白表达量明显升高,提示成功建立稳定转染细胞系.在体外NAFLD条件下,过表达TREM2可减轻AML12肝细胞的凋亡和脂质沉积(P＜0.05).静息态下,过表达TREM2或sTREM2均使得G1期细胞数目比例减少(P＜0.05),S期细胞数目比例增多(P＜0.01),而体外NAFLD条件均使得S期细胞数目比例减少(P＜0.01),G2期细胞数目比例增多(P＜0.01).结论 肝细胞中TREM2的过表达可减少肝细胞凋亡和脂质沉积,进而保护肝细胞在NAFLD条件下免受损伤.
关键词：非酒精性脂肪性肝病AML12肝细胞TREM2细胞凋亡
分类号：R575.5(消化系及腹部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(82230015)国家自然科学基金(31970829)陕西省创新能力支撑计划项目(2021TD-36)
论文发表日期：2024-06-28
在线出版日期：2026-08-26（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 609-616 )
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