炎症应答中去泛素化酶圆柱瘤蛋白相互作用分子筛选和验证
杨羽淇
安冬洁
何飞
秦鸿雁
空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室,陕西西安 710032
摘要：目的 筛选炎症应答中与去泛素化酶圆柱瘤蛋白(CYLD)相互作用分子,探究并验证CYLD和参与NF-κB信号通路调节的桥梁蛋白14-3-3家族分子之间是否在细胞内存在相互作用.方法 通过免疫共沉淀(Co-IP)-飞行质谱筛选可能与CYLD相互作用分子,在不同的刺激条件下诱导骨髓原代巨噬细胞向M1和M2极化,利用qRT-PCR、Western blotting技术检测CYLD及可能相互作用的候选分子14-3-3在巨噬细胞内的表达水平.结果 CYLD抗体可以捕获14-3-3蛋白全部的7种亚型(β、γ、ε、η、ζ、δ、θ),提示CYLD很可能与14-3-3蛋白存在相互作用,选取质谱结果中得到特异性肽段最多的3种14-3-3亚型γ、ε、η(14-3-3γ/ε/η),检测结果显示在M0、M1、M2型巨噬细胞中CYLD和14-3-3γ/ε/η均有表达.构建了Myc-CYLD和Flag-14-3-3γ/ε/η真核过表达载体,用Flag抗体成功沉淀出CYLD蛋白,Co-IP结果提示CYLD和14-3-3γ/ε/η三种亚型均存在相互作用.免疫荧光实验显示CYLD和14-3-3在巨噬细胞内存在共定位现象.结论 巨噬细胞炎症应答中CYLD和14-3-3γ/ε/η三种亚型可能存在物理上的相互作用.
关键词：巨噬细胞圆柱瘤蛋白14-3-3亚型炎症应答
分类号：R575.2(消化系及腹部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(82230015)国家自然科学基金(31970829)陕西省创新能力支撑计划项目(2021TD-36)
论文发表日期：2024-06-28
在线出版日期：2026-08-26（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 617-624 )
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