乙型肝炎病毒大表面蛋白诱导内质网应激调控p27 IRES翻译活性的机制研究
郭亦笑
邵杰
尉丁
陈志南
边惠洁
国家分子医学转化中心,空军军医大学基础医学院细胞生物学教研室,陕西西安 710032
摘要：目的 探讨在乙型肝炎病毒大表面蛋白(LHB)诱导的内质网应激条件下,抑癌基因p27 5'UTR内部核糖体进入位点(IRES)的活性变化及其调控机制.方法 构建双荧光素酶报告质粒,用双荧光素酶报告基因实验检测p27 5'UTR中IRES的活性;利用qRT-PCR和Western blotting检测LHB诱导的未折叠蛋白反应相关分子水平;RNA下拉、质谱技术和RNA免疫沉淀筛选并确认潜在的与p27 5'UTR结合的相关蛋白;siRNA转染建立PCBP2和ANXA2敲低细胞模型,用双荧光素酶报告基因检测在敲低PCBP2和ANXA2后p27 IRES翻译活性的变化.结果 成功构建了检测p27 IRES活性的双荧光素酶报告质粒.LHB可以诱导内质网应激,同时显著提高p27的IRES翻译活性(P＜0.01).LHB过表达激活了 PERK通路并提高了 eIF2α的磷酸化水平,特异性PERK通路抑制剂GSK2606414使RERK和eIF2α的磷酸化水平降低,从而引起p27 5'UTR的IRES翻译活性显著降低(P＜0.01,P＜0.05).同时,磷酸酶抑制剂Sa1003能显著增加eIF2α磷酸化水平,使p27 IRES活性进一步增强(P＜0.01,P＜0.05).最后,我们发现PCBP2和ANXA2作为潜在的反式作用因子可增强p27 IRES活性.结论 LHB诱导的内质网应激通过eIF2α磷酸化增强p27 IRES翻译活性.反式作用因子PCBP2和ANXA2正向调控其IRES翻译活性.
关键词：乙型肝炎病毒大表面蛋白p27 5’UTR内质网应激内部核糖体进入位点反式作用因子
分类号：R735.7(消化系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(82130084)
论文发表日期：2024-07-28
在线出版日期：2026-08-26（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 732-739 )
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