柑橘黄龙病PCR检测技术优化
杨亚1
石卓艺2
周闰1
彭丁文3
朱宝德2
王丽艳4
孙倩楠3
唐志敏5
何艳晴3
申超峰6
1.郴州市农业科学研究所,湖南 郴州 423000;郴州市柑橘黄龙病检验检测中心,湖南 郴州 423000;郴州市柑橘脱毒技术研发中心,湖南 郴州 4230002.湘南学院,湖南 郴州 4230003.郴州市农业科学研究所,湖南 郴州 423000;郴州市柑橘黄龙病检验检测中心,湖南 郴州 423000;郴州市柑橘脱毒技术研发中心,湖南 郴州 423000;郴州市农作物分子技术应用研发中心,湖南 郴州 4230004.郴州市柑橘黄龙病检验检测中心,湖南 郴州 423000;郴州市农业农村局,湖南 郴州 4230005.郴州市农业科学研究所,湖南 郴州 423000;郴州市柑橘黄龙病(木虱)监测与防控技术研发中心,湖南 郴州 4230006.郴州市农业科学研究所,湖南 郴州 423000;郴州市柑橘脱毒技术研发中心,湖南 郴州 423000;郴州市农作物分子技术应用研发中心,湖南 郴州 423000
摘要：为提高Jagoueix等建立的柑橘黄龙病PCR检测体系的检测效率和检出率,本研究对基因组DNA提取、PCR体系和PCR程序进行优化,分析了不同萃取次数、裂解温度和抗氧剂组合对总DNA质量的影响,并设置不同引物浓度梯度和退火温度梯度,研究其对检测效果的影响.结果表明,萃取次数对DNA质量基本无影响;水浴 65℃裂解比常温裂解提取的DNA质量更优,但总体差别不大;DNA提取液中添加β-巯基乙醇、β-巯基乙醇和PVP或者二者均不加入,对最终的基因组DNA的质量和纯度影响不大;引物浓度为 0.4～1.0 μmol/L出现稳定特征条带,引物浓度为 0.1 μmol/L时仍会产生引物二聚体;在 66.5℃退火温度下的检测结果最优.因此,采取一次萃取、常温裂解、不添加抗氧化剂可简化DNA提取步骤;将引物浓度调整为 0.8 μmol/L效果最佳;退火温度 66.5℃可提高检出率;优化后检测体系操作简便、稳定性好、检测率高,适于柑橘黄龙病的批量检测.
关键词：柑橘黄龙病DNA提取PCR检测体系
分类号：S436(病虫害及其防治)
资助基金：国家重点研发计划(2024YFD2300802)
论文发表日期：2024-12-20
在线出版日期：2026-08-28（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 20-24,30 )
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