介导尤文肉瘤融合基因的重组腺病毒的构建及其在外周血单个核细胞(PBMC)中的表达
曲华毅
郭卫
李健
何湘君
1.100044,北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心2.100044,北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心3.100044,北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心4.100044,北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心
摘要：目的构建尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1重组腺病毒,并检测其在外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,为进一步进行尤文肉瘤的免疫治疗奠定基础.方法将质粒pEC1 EWS/FLI1酶切,切出的EWS-FLI1 cDNA片段克隆至腺病毒穿梭质粒padtrack-cmv的HCMV启动子下游.将连接后的穿梭质粒和骨架质粒Padeasy-1共同转化大肠杆菌BJ5183菌株,获得同源重组后的腺病毒质粒pAD EWS/FLI1.将此质粒转染293细胞,包装产生腺病毒Ad EWS-FLI1.扩增、纯化产生高滴度的Ad EWS-FLI1.转染PBMC,并通过RT-PCR和免疫组化法检测EWS-FLI1的表达.结果同源重组后产生的pAD EWS/FLI1经PCR鉴定构建成功,纯化后的滴度为4×1010/ml.转染PBMC后,RT-PCR证实有EWS/FLI1 mRNA的转录,免疫检测法检测在PBMC中有EWS/FLI1的表达.结论重组腺病毒Ad EWS/FLI1构建成功,并能在PBMC中稳定有效地表达,为进一步进行尤文肉瘤的免疫治疗研究奠定了基础.
关键词：腺病毒尤文肉瘤融合基因同源重组
分类号：R73(肿瘤学)
资助基金：国家自然科学基金(30000763)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 161-166 )
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