TK基因转染骨肉瘤U-2细胞体外实验研究
李晋惠
吕智
马卓
冯毅
王军
兰彦平
张桦栋
1.山西医科大学附属第二医院骨科,太原,0300012.山西医科大学附属第二医院骨科,太原,0300013.山西医科大学附属第二医院骨科,太原,0300014.山西医科大学附属第二医院骨科,太原,0300015.山西医科大学附属第二医院骨科,太原,0300016.山西医科大学附属第二医院骨科,太原,0300017.山西医科大学附属第二医院骨科,太原,030001
摘要：目的 研究脂质体介导的TK/GCV系统对人骨肉瘤细胞的杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法 构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21以及鉴定测序,提取、纯化重组质粒DNA,培养和转染人骨肉瘤细胞株U-2 OS,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,用转染后的培养液的上清加入TK (-) U-2 OS中观察旁观者效应.结果 成功地构建出包含有TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计.荧光显微镜下观察U-2 OS (TK+)呈现绿色荧光.U-2 OS TK/GCV培养上清液可明显诱导细胞凋亡.但将上清液用0.2μm的滤膜滤过后,诱导凋亡作用消失.结论成功构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,体外实验表明人骨肉瘤细胞系U-2 OS对脂质体介导的TK/GCV系统敏感,并且有明显的旁观者效应,可望成为骨肉瘤基因治疗的新途径.
关键词：TK基因转染骨肉瘤旁观者效应
资助基金：山西省自然科学基金资助项目(2007011112)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 272-276 )
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