TLR4干扰RNA腺病毒的构建及其对肺泡巨噬细胞内毒素反应的影响
吴飞翔1
吕欣1
俞卫锋1
黄盛东2
徐学武1
孙玉明1
袁扬2
卞金俊3
1.解放军第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,上海,2004382.解放军胸心外科研究所,上海,2004333.解放军第二军医大学长海医院麻醉科,上海,200433
摘要：目的 构建表达大鼠TLR4 siRNA的腺病毒,并观察对内毒素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞TLR4的抑制和TNF-α、IL-10释放的影响.方法合成双链寡核苷酸并克隆人pShuttleH1载体,pShutdeH1-TLR4线性化后电转化到含pAdEasy-l的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,重组质粒用脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siTLR4;扩增、纯化腺病毒,TCID50法测定病毒滴度.原代培养大鼠肺泡巨噬细胞,腺病毒Ad-siTLR4感染后加入内毒素,采用RT-PCR和Westem blot观察TLR4蛋白及mRNA的表达,ELISA检测TNF-α、IL-10的释放情况.结果目的基因序列正确并成功克隆人腺病毒,腺病毒Ad-siTLR4滴度为5.72×109 pfu/mL.转染腺病毒后的内毒素诱导的肺泡巨噬细胞TLR4蛋白和mRNA水平下降,TNF-α、IL-10的表达均明显减弱.结论本研究成功构建了表达大鼠TLR4 siRNA的腺病毒,具有良好的抑制TLR4和TNF-α、IL-10的作用,为下一步动物体内实验基因治疗急性肺损伤奠定良好的基础.
关键词：Toll样受体4RNA干扰腺病毒TNF-αIL-10
分类号：R349.64(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30700788)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 230-234,插1 )
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