hOGG1基因高表达A549细胞株的构建及其对氧化应激的影响
王昱1
卢仲毅2
许峰2
朱宇熹3
1.400038,重庆,第三军医大学西南医院儿科;400014,重庆医科大学附属儿童医院PICU2.重庆医科大学附属儿童医院PICU,4000143.400016,重庆医科大学附属第一医院肿瘤科;Department of Radiation Oncology & Image-applied Therapy Kyoto University Graduate School of Medicine,Japan
摘要：目的 构建人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(hOGG1)基因高表达细胞株,并初步探讨该细胞株对DNA氧化损伤与修复作用的影响.方法 提取人血液淋巴细胞总RNA,设计hOGG1特异性引物,RT-PCR扩增后构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A/hOGG1载体.经EcoRI和KpnI酶切,凝胶电泳及DNA测序证实建立成功后,稳定转染A549细胞,Western blot法检测转染阳性细胞hOGG1蛋白表达的改变.以构建的hOGG1基因高表达细胞株为研究对象,H2O2为受试物,彗星试验检测比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况.结果 成功构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A/hOGG1质粒并转染目的 细胞,Western blot法检测转染靶细胞中hOGG1蛋白表达比空白组和阴性对照组明显增加(P<0.05).相同H2O2浓度下,转染细胞彗星细胞率和Olive Tail Moment明显低于空白组和阴性对照组,且修复完成率高,修复时间缩短(P<0.05),提示细胞对抗DNA损伤和修复能力均显著增高P<0.05).结论 hOGG1基因的高表达可确切减轻细胞氧化损伤敏感性并提升DNA的修复能力.hOGG1基因高表达细胞株的成功构建,为基因水平的靶向治疗研究提供了一种有效手段.
关键词：hOGG1基因真核表达载体彗星试验DNA修复
资助基金：国家自然科学基金(30670931)重庆市自然科学基金(2006BB5035)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 800-804,后插1 )
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