人IGF-I基因慢病毒介导RNA干扰有效靶点的设计及筛选
刘红升
赵晓东
苏琴
党伟
果应菲
袁晓玲
姚咏明
1.解放军总医院第一附属医院急救部,北京,1000482.解放军总医院第一附属医院急救部,北京,1000483.解放军总医院第一附属医院急救部,北京,1000484.解放军总医院第一附属医院急救部,北京,1000485.解放军总医院第一附属医院急救部,北京,1000486.解放军总医院第一附属医院急救部,北京,1000487.解放军总医院第一附属医院急救部,北京,100048
摘要：目的 设计并筛选人IGF-I有效RNA干扰片段,构建IGF-I-siRNA慢病毒表达载体.方法 对人IGF-I基因编码区分析、筛选序列4条,阴性对照序列1条.与pGCL-GFP质粒重组后,转染大肠杆菌感受态细胞.阳性克隆经过鉴定后得到正确重组子,制备编码慢病毒颗粒的重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒,共转染293T 细胞,体外直接感染表达IGF-I的人血管平滑肌细胞.通过用Realtime-PCR检验干扰效果.结果 ①成功地合成四条编码发夹siRNA序列的单链DNA,并将其克隆到pGCSIL-GFP载体中,构建重组质粒PscSI-1、2、3、4,及无关基因的重组质粒PscNC,酶切鉴定和测序证实载体构建成功;②Realtime-PCR检测IGF-I的mRNA表达,发现重组质粒PscSI-1转染人血管平滑肌细胞后IGF-I mRNA表达最低,重组质粒PscNC转染组细胞内IGF-I mRNA的表达量与空白对照的水平接近(P>0.05).结论 成功构建了小的发夹式IGF-I慢病毒表达载体.在人IGF-I序列位点1010～1028 bp、序列为ACCTTGTCTAAGTGGTTTA可以在人血管平滑肌细胞中实现对人IGF-I基因表达的有效沉默.
关键词：类胰岛素生长因子-I(IGF-Ⅰ)慢病毒表达载体RNA干扰
资助基金：国家自然科学基金(30125020)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 421-426,彩1 )
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