干扰素刺激因子对脂多糖诱导的小鼠树突状细胞坏死性凋亡的影响
李金儒1
段昱1
凌花2
李琼2
姚咏明3
戴新贵1
1.510515 广东广州,南方医科大学第一临床医学院2.423000 湖南郴州,南方医科大学附属郴州医院(郴州市第一人民医院)重症医学科3.100853 北京,解放军总医院医学创新研究部转化医学研究中心第四医学中心
摘要：目的 探讨干扰素刺激因子(STING)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠树突状细胞(DC)坏死性凋亡的影响.方法 LPS 1 µg/mL刺激第3～10代对数生长期小鼠DC2.4细胞系,将DC分为对照组、LPS 6 h组、LPS 12 h组、LPS 24 h组和LPS 72 h组,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测磷酸化干扰素刺激因子(P-STING)、STING、磷酸化混合系激酶区域样蛋白(P-MLKL)、MLKL蛋白的表达.将转染含STING基因小干扰RNA序列慢病毒的DC分为敲减STING+磷酸盐缓冲液(PBS)组、敲减STING+LPS组,将转染空载慢病毒的DC分为空载体+PBS组、空载体+LPS组,给予相应刺激并培养12 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率,行核酸染料(SYTOX Green)染色观测细胞凋亡情况并计算凋亡率,Western blot检测P-STING、STING、P-MLKL、MLKL蛋白表达.结果 与对照组比较,LPS 12 h组STING蛋白表达显著升高(P＜0.05),LPS 12 h组、LPS 24 h组P-MLKL/MLKL比值均显著升高(P＜0.05),将12 h作为后续刺激时长.培养12 h,与PBS组比较,LPS组细胞的凋亡率显著上升,且LPS组细胞器普遍肿胀,细胞质中出现大量空泡,细胞膜完整性被破坏,细胞发生崩解.空载体组与敲减STING组细胞转染慢病毒72 h后,Western blot检测提示,sh1-STING敲减组STING蛋白较空载体组、sh2-STING敲减组和sh3-STING敲减组表达显著降低(P＜0.05).培养12 h,流式细胞术检测显示,空载体+PBS组、空载体+LPS组、sh1-STING敲减+PBS组、sh1-STING敲减+LPS组细胞凋亡率分别为(36.34±24.42)％、(52.57±35.77)％、(37.81±28.9)％、(46.45±32.44)％.培养 12 h,SYTOX Green 染色检测显示,空载体+PBS组、空载体+LPS组、sh1-STING敲减+PBS组、sh1-STING敲减+LPS 组细胞凋亡率分别为(13.4±6.3)％、(67.6±24.0)％、(2.0±1.1)％和(7.1±4.2)％.培养12 h,与空载体+LPS组比较,sh1-STING敲减+LPS组细胞凋亡率以及细胞中P-MLKL/MLKL比值均显著降低(P＜0.05);与空载体+PBS组比较,空载体+LPS组P-MLKL/MLKL比值明显升高(P=0.011);但与敲减STING+PBS组比较,敲减STING+LPS组P-MLKL/MLKL比值差异不显著(P=0.889).结论 LPS刺激下小鼠DC中STING蛋白表达增强,并于12 h达到活化高峰,且活化的STING蛋白对细胞坏死性凋亡具有显著的促进效应.
关键词：脓毒症树突细胞坏死性凋亡干扰素刺激因子免疫功能障碍
资助基金：国家自然科学基金(82241062)湖南省卫健委科研项目(B202317017622)湘南学院科研课题(2020XJ89)
论文发表日期：2024-07-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 611-617 )
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