人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达
王艳1
陈庆状2
蒋德旗1
李明星1
贾思远3
朱宁4
王勇1
1.南方医科大学珠江医院，药剂科，广东广州市5102822.广州市中西医结合医院药剂科,广东广州市,5108003.南方医科大学珠江医院烧伤科,广东广州市,5102824.南海区第三人民医院药剂科,广东佛山市,528244
摘要：目的：构建HSP75基因重组腺病毒载体，观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因，连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域，构建重组穿梭质粒pHBAd-MCM-HSP75-GFP，在LipofiterTM转染试剂的介导下与腺病毒辅助骨架质粒pHBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞，整合包装成重组腺病毒， TCID50法测定病毒滴度。使用荧光显微镜、流式细胞仪和Western blotting观察重组腺病毒在C17.2细胞中的感染情况及HSP75蛋白的表达水平。结果通过酶切鉴定、测序、PCR鉴定，HSP75基因已正确插入穿梭质粒中，并与病毒骨架质粒整合包装成重组腺病毒；重组腺病毒滴度为1.0×1010 PFU/ml；Western blotting检测，转染后的神经干细胞表达HSP75蛋白。结论 HSP75重组腺病毒载体成功构建，对C17.2神经干细胞具有较高的表达效力。
关键词：热休克蛋白75重组腺病毒载体C17.2神经干细胞
分类号：R741(神经病学)
资助基金：国家自然科学基金(No.30973162)广东省自然科学基金(No.S2012010008199)广东省自然科学基金(No.S2013010015546)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 264-268 )
英文信息