重组小鼠pEGFP-GDNF质粒的构建及其在骨髓基质干细胞中的表达
姜晓兵1
赵洪洋1
周凤2
周伟1
刘如恩1
张建国1
1.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科,湖北,武汉,4300222.深圳市眼科医院,广东,深圳,518000
摘要：目的克隆小鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)并转染骨髓基质干细胞,制备转基因工程细胞.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从新生小鼠大脑皮层细胞克隆出GDNF cDNA片断,以pEGFP-C1质粒为载体导入骨髓基质干细胞,用流式细胞仪检测转染率,用荧光显微镜和免疫细胞化学方法检测蛋白质的表达.结果流式细胞仪检测转染率约50%,荧光显微镜下见转染pEGFP/GDNF质粒的骨髓基质干细胞(MSC)发出明亮的绿色荧光,免疫细胞化学方法检测发现转基因MSC抗GDNF蛋白染色成强阳性,正常MSC染色成阴性.结论成功制备了高效表达外源性基因GDNF的MSC.绿色荧光蛋白作为报告基因可反应GDNF表达情况.
关键词：胶质细胞源性神经营养因子骨髓干细胞增强型绿色荧光蛋白基因转染
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)R739.41(神经系肿瘤)
资助基金：湖北省科技攻关计划(2002AA301C26)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 363-366 )
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