真核表达载体pcDNA3.1-3a的构建及其在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中的表达
秦怀洲1
张治国1
王举磊1
吴琳2
李立宏1
高国栋1
1.第四军医大学第二附属医院神经外科,西安,7100382.第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,西安,710032
摘要：目的 在pcDNA3.1真核表达载体中构建表达融合myc/his标签的甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,并在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中进行验证,以期获得可表达甲基化酶催化结构域的融合基因.方法 以甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc/his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc/his标签序列的目的 区段-甲基化酶催化结构域3a,将其克隆入真核表达载体peDNA3.1;以EcoR I、EcoR V双酶切和PCR方法对构建的表达载体进行鉴定,并通过测序证明载体构建正确,同时检测甲基化酶3a在SK-N-SH细胞中的表达.结果 通过PCR方法获得了含有甲基化酶催化结构域的真核表达载体pcDNA3.1-3a,并通过免疫印记方法验证了在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞样品中用抗his标签抗体可以特异性识别目的 蛋白.结论 正确构建了甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,其可在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中表达.
关键词：DNA甲基化酶真核表达载体神经母细胞瘤
分类号：R730.264(一般性问题)R730.231(一般性问题)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 541-544 )
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