LRIG1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定
毛峰1
席桂发2
杨洪宽1
王宝峰1
郭东生1
雷霆1
1.华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科,武汉,4300302.浙江大学医学院附属第二医院神经外科,310009
摘要：目的 探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助.方法 用EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼脂糖凝电泳回收LRIG1片段和载体片段;通过T4连接酶将LRIG1基因连接至慢病毒载体上;按Lenti-X HT慢病毒包装试剂盒说明包装慢病毒;用EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ双酶切法鉴定重组慢病毒载体;然后用plvxDsRed-monomer-n1l和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分别转染293T细胞和胶质瘤细胞系U87细胞,荧光定量PCR和western blot 检测LRIG1 mRNA和蛋白表达.结果 U87细胞感染病毒载体后经嘌呤霉素筛选显示细胞红色荧光较空载体感染细胞减弱;实时PCR结果显示LRIG1 mRNA过表达组较对照明显升高;提取感染后细胞蛋白,Western blot鉴定flag标签蛋白表达成功.结论 LRIG1基因慢病毒表达载体能感染胶质瘤细胞系U87细胞,可使外源基因获得稳定表达.
关键词：人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1慢病毒基因转染构建鉴定
分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30872653)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 605-608 )
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