大鼠Rars基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定
沈寅
符荣
赵洪洋
王海均
王文良
张立志
1.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科, 武汉,4300222.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科, 武汉,4300223.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科, 武汉,4300224.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科, 武汉,4300225.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科, 武汉,4300226.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科, 武汉,430022
摘要：目的 构建针对大鼠Rars基因的siRNA重组腺病毒载体,并观察大鼠神经元细胞病毒转染前后目的蛋白表达量变化.方法 将原代培养的大鼠神经元细胞随机分为观察组、阴性对照组及空白对照组.观察组细胞转染携带Rars siRNA序列的重组腺病毒,阴性对照组细胞转染携带Scramble无意义序列的重组腺病毒,空白对照组不转染任何病毒.观察各对照组表达绿色荧光蛋白(GFP)的阳性细胞数,计算转染率,并检测转染前后Rars基因对应产物精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)蛋白的表达量,评价基因沉默效率.结果 成功构建包含Rars基因干扰序列及Scramble序列的重组腺病毒,病毒滴度达1010级.利用重组腺病毒感染大鼠神经元细胞48 h后,绝大部分细胞表达GFP,转染率＞95％.含Rars干扰序列的病毒转染细胞可使ArgRS蛋白表达量显著降低(P＜0.01),沉默效率＞60％.含Scramble对照序列的病毒则不能产生明显的基因沉默效应.结论 本实验所构建的siRNA重组腺病毒载体可有效沉默大鼠Rars基因,降低ArgRS蛋白表达.
关键词：Rars基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体精氨酰-tRNA合成酶
分类号：R651.2(外科学各论)R363.2+1(病理学)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息