延胡索总生物碱对慢性脑缺血大鼠海马沉默信息调节因子1/肿瘤抑制基因P53蛋白信号通路的调控作用及其机制研究
李君
齐雅芝
唐娅
曹睿
翟燕玲
韩玉生
徐强
150040 哈尔滨,黑龙江中医药大学基础医学院
摘要：目的 研究延胡索总生物碱(TAC)对慢性脑缺血(CCH)大鼠海马CA1区沉默信息调节因子1(Sirt1)/肿瘤抑制基因P53蛋白(P53)信号通路相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机制.方法 将大鼠按照随机数字表法完全随机分为假手术组、模型组、TAC高剂量组(14mg/kg)、TAC低剂量组(7mg/kg),每组6只.运用改良版双侧颈总动脉永久性阻断(BCCAO)法建立CCH大鼠模型,假手术组仅对双侧颈总动脉做分离处理.造模完成1周后,每组分别灌胃给予对应药物或等体积等渗盐水,每日1次,治疗持续14d.采用苏木素-伊红染色法观察大鼠海马区病理变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿三磷酸缺口末端标记测定(TUNEL)法检测其神经元凋亡情况;免疫印迹染色和免疫组织化学法分别测定Sirt1、P53、P53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(BAX)在大鼠海马区的表达情况并进行各组间比较.结果(1)4组凋亡细胞数量和凋亡率差异有统计学意义(F值分别为71.417、76.835,均P＜0.01).4组间Sirt1、P53、PUMA、BAX、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值差异均有统计学意义(F值分别为 1 178.390、42.465、867.413、110.656 和 131.801,均 P＜0.01).4 组间 Sirt1、P53、PUMA、BAX、Bcl-2蛋白相对表达水平差异均有统计学意义(F值分别为9.497、11.863、58.552、186.855和12.466,均P＜0.01).(2)模型组大鼠海马区脑组织神经元较假手术组排列紊乱,胞核固缩增多,胶质细胞和炎细胞明显增多.与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元凋亡细胞数量及凋亡率明显上升[分别为(10.8±1.5)个比(2.0±0.9)个和(35.5±4.5)％比(6.2±2.6)％;均P＜0.05];Sirt1、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值明显降低(84.6±6.6比244.6±4.9,138.5±6.7比210.9±10.0;均P＜0.05),P53、PUMA、BAX蛋白阳性表达区域平均积分光密度值明显升高(156.8±11.6 比 93.5±11.6,151.3±3.3 比 38.0±4.0,87.0±5.0 比 38.4±5.5;均P＜0.05);Sirt1、Bcl-2 蛋白相对表达水平明显降低(0.51±0.07 比 0.74±0.07,0.36±0.03 比0.53±0.05;均 P＜0.05),P53、PUMA、BAX 蛋白相对表达水平明显升高(0.37±0.06 比 0.21±0.02,0.62±0.06 比0.23±0.02,1.08±0.06 比 0.45±0.03;均P＜0.05).(3)TAC 高、低剂量组大鼠海马区组织结构较模型组相对紧密均匀,神经元排列整齐,细胞结构也相对清晰完整.与模型组比较,TAC高、低剂量组神经元凋亡细胞数量[高、低剂量组分别为(3.8±0.7)、(6.2±1.2)个]及凋亡率[高、低剂量组分别为(12.4±2.8)％、(20.2±3.9)％]均明显下降(均P＜0.05);Sirt1、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值(高、低剂量组Sirt1分别为150.0±4.8、131.3±1.3,Bcl-2分别为207.1±7.4、169.5±3.9)明显升高(均P＜0.05),P53、PUMA、BAX蛋白阳性表达区域平均积分光密度值(高、低剂量组P53分别为105.9±8.8、115.5±9.0,PUMA分别为56.8±5.1、74.4±3.9,BAX分别为40.5±5.6、48.4±5.0)明显降低(均P＜0.05);Bcl-2蛋白相对表达水平明显升高(高、低剂量组分别为0.53±0.05、0.47±0.02,P＜0.05),P53、PUMA、BAX蛋白相对表达水平明显降低(高、低剂量组 P53 分别为0.21±0.02、0.24±0.04,PUMA 分别为0.36±0.02、0.28±0.04,BAX分别为0.52±0.02、0.54±0.03;均P＜0.05),TAC高剂量组Sirt1蛋白相对表达水平明显升高(0.71±0.05,P＜0.05),TAC低剂量组Sirt1蛋白相对表达水平(0.52±0.08)差异无统计学意义(P＞0.05).结论TAC可以减轻CCH大鼠海马CA1区神经元损伤,降低海马区神经元细胞的凋亡率,其机制可能与TAC激活Sirt1/P53通路、抑制P53蛋白活性,从而调控其下游凋亡相关蛋白的表达水平有关.
关键词：延胡索总生物碱慢性脑缺血沉默信息调节因子1P53细胞凋亡
资助基金：国家自然科学基金(82074530)
论文发表日期：2023-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 837-845 )
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