酶标仪法测定离心泵泵头表面肝素涂层生物活性的研究
徐苏华
刘婧群
许朝生
黄敏菊
510663 广州,广东省医疗器械质量监督检验所国家药品监督管理局体外循环器械重点实验室
摘要：目的 建立酶标仪法测定离心泵泵头表面肝素的生物活性.方法 由抗凝血酶(AT)饱和的肝素化表面失活的凝血酶量来量化肝素生物活性:肝素表面与过量的血浆蛋白AT结合,形成AT饱和的肝素化表面(过量的AT通过清洗程序去除),上述肝素化表面又与过量凝血酶Ⅱa结合,残留的凝血酶Ⅱa与显色底物反应,凝血酶肽键H-D-Phe-Pip-Arg-pNa被裂解,释放出生色团,其可以在405 nm下进行测试并定量.结果 应用酶标仪上波长405 nm时的动力学吸光度评估生物活性,生物活性测定表明:对照品(无涂层的离心泵泵头)的结果为-0.01 IU/cm2(≤0.05 IU/cm2),所有3种供试品的结果为0.29 IU/cm2、0.40 IU/cm2和0.32 IU/cm2(均≥0.1 IU/cm2),符合生物活性试验的有效性标准,对照品和供试品的生物活性均被视为通过.结论 通过酶标仪定量测试凝血酶肽键裂解释放生色团的含量,可得到与肝素涂层反应的Ⅱa的量,进一步反推AT的量,最终计算出肝素涂层的生物活性.该方法操作简便,一次可以测定多份样本,检测速度快;具有需要的样本量少、重复性好的特点,适用于对离心泵泵头表面肝素涂层的生物活性定量检测.
关键词：酶标仪法离心泵泵头肝素生物活性抗凝血酶凝血酶体外膜氧合
资助基金：国家重点研发计划(2023YFC2410304)广东省药品监督管理局科技创新项目(2024ZDZ05)
论文发表日期：2024-10-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 415-419 )
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