Cdc2基因敲低逆转录病毒载体设计与构建方法
程序曲
王金鹏
黄强
王爱东
董军
兰青
1.苏州大学附属第二医院神经外科暨脑肿瘤研究室,苏州,2150042.苏州大学附属第二医院神经外科暨脑肿瘤研究室,苏州,2150043.苏州大学附属第二医院神经外科暨脑肿瘤研究室,苏州,2150044.苏州大学附属第二医院神经外科暨脑肿瘤研究室,苏州,2150045.苏州大学附属第二医院神经外科暨脑肿瘤研究室,苏州,2150046.苏州大学附属第二医院神经外科暨脑肿瘤研究室,苏州,215004
摘要：目的设计和构建cdc2基因敲低的表达siRNA的逆转录病毒重组载体.方法利用在线软件siRNA Selection Program和siDirect设计干扰cdc2基因靶序列,合成回文DNA序列,退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体扩增、抽提后行双酶切电泳鉴定和测序分析,再转染phoenix细胞,产生逆转录病毒,并利用NIH3T3细胞测定病毒滴度.结果pSUPER表达siRNA重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析,证实插入的60 bp序列与原序列一致,位置正确.pSUPER.retro-C1、pSUPER.retro-C2病毒滴度值分别为4.25×105CFU/m1和6.00×105CFU/ml.结论cdc2基因表达siRNA逆转录病毒重组载体构建成功,可为研究胶质瘤分子病因学提供有用工具.
关键词：RNA干扰基因cdc2蛋白激酶逆转录病毒载体基因沉默神经胶质瘤
分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30371457)江苏省研究生培养创新工程项目(50320026)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 256-259 )
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