白细胞介素12基因修饰大鼠胶质瘤9L/rIL-12细胞的建立
林健1
戴学军1
王伟民1
张宏斌2
武婕2
冼江2
詹纯列2
王捷2
1.中国人民解放军广州军区广州总医院神经外科,广东,广州,5100102.中国人民解放军广州军区广州总医院医学实验科,广东,广州,510010
摘要：目的 构建大鼠白细胞介素12(rIL-12)基因真核表达载体质粒,建立rIL-12基因修饰并稳定表达的大鼠胶质瘤9L/rIL-12细胞.方法 用Trizol提取大鼠腹腔巨噬细胞总RNA,RT-PCR方法分别获取rp40和rp35 cDNA,依次克隆人pcDNA3.1(-)/mycHis A质粒中,以IRES连接双亚基,构建成双顺反子真核表达载体质粒pcDNA3.1/rIL-12.将构建的重组质粒转染大鼠胶质瘤9L细胞,G418筛选单克隆细胞株,ELISA法检测其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量,同时抽提细胞RNA,RT-pCR方法检测rp40、rp35基因在9L/rIL-12细胞中的表达.结果 所得rp40cDNA序列与Gene Bank NM022611及AF133197、rp35cDNA序列与Gene Bank NM053390及AF177031均一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确.质粒转染9L细胞后,获得2个rIL-12基因稳定、高效表达的9L/rIL-12单克隆细胞株,其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量分别为139.0、162.1 pg/ml,RT-PCR结果显示细胞中rIL-12基因表达呈阳性.结论 成功构建了rIL-12真核表达质粒pcDNA3.1/rIL-12,并建立了9L/rIL-12细胞株,为rIL-12基因修饰的胶质瘤疫苗研究打下了基础.
关键词：大鼠白细胞介索12质粒神经胶质瘤9L细胞
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：广东省自然科学基金(001122)军队医学科研项目(01MA038)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 321-324 )
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