苦瓜McPDS基因克隆及CRISPR/Cas9基因编辑载体构建
韩鑫1
郭金菊2
张惠尧2
吴廷全2
张长远2
1.广东省农业科学院设施农业研究所 广州 510640;华中农业大学园艺林学学院 武汉 4300702.广东省农业科学院设施农业研究所 广州 510640
摘要：以苦瓜八氢番茄红素脱氢酶(phytoene dehydrogenase,PDS)基因为靶标,构建其特异gRNA的CRISPR/Cas9 基因编辑载体,以期为建立苦瓜CRISPR/Cas9 基因编辑技术体系奠定基础.以苦瓜自交系B07 叶片cDNA为模板,同源克隆苦瓜McPDS基因CDS序列.结果表明,McPDS基因CDS序列全长 1731 bp,编码 576 个氨基酸,蛋白质相对分子质量为 64.44 kD,理论等电点(PI)为 7.09.跨膜结构分析结果表明,该蛋白为亲水性非跨膜蛋白.系统进化树分析结果表明,McPDS与黄瓜、甜瓜等葫芦科植物中的PDS蛋白同源性较高.此外,以McPDS为靶标基因,在 5'端筛选 2 个高特异性靶点,经设计引物,成功构建 1 个双靶点CRISPR/Cas9 基因编辑载体,为苦瓜基因编辑体系的建立奠定了技术基础.
关键词：苦瓜McPDS基因克隆载体构建基因编辑
分类号：S642.5(园艺)
资助基金：广东省农业科学院协同创新中心项目(XTXM202203)广州市科技计划项目(202206010170)广州市科技计划项目(202201010493)广东省自然科学基金(2022A1515010343)广东省农业农村厅种业振兴行动专项(2022-NPY-00-027)广东省农业科学院创新基金项目(202301)广东省农业科学院学科团队建设项目(202130TD)
论文发表日期：2024-03-05
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 20-27 )
英文信息