先天性长QT综合征HERG基因真核表达质粒的构建及体外表达
赵永辉1
崔长琮2
李宇2
1.450003,郑州市,河南省人民医院心内科2.西安交通大学第一医院心内科,环境与疾病相关基因教育部重点实验室
摘要：目的 构建携带HERG目的基因的真核表达重组质粒pcDNA3-HERG,并观察HERG基因在心肌细胞中的表达情况.方法 应用基因重组技术,将原核克隆载体pGEM-HERG中HERG基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3,以酶切和聚合酶链反应(PCR)方法鉴定重组质粒pcDNA3-HERG的正确性;以Lipofectamine为介导将重组质粒与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染培养的乳兔心肌细胞,转染48 h后荧光显微镜下观察计算转染效率并采用Western Blot和全细胞膜片钳技术检测HERG基因的表达情况.结果 酶切和PCR结果均证实pcDNA3-HERG的正确性,以脂质体为介导,其转染心肌细胞的效率为(15.2±2.6)%;Westem Blot和膜片钳技术检测到HERG蛋白和HERG通道电流的表达.结论 成功构建HERG基因真核表达重组质粒pcDNA3-HERG,转染心肌细胞后可表达有功能的离子通道,为今后研究突变型HERG的功能提供了可行的技术平台.
关键词：心脏病/先天性重组遗传基因表达基因HERG
分类号：R541.7(心脏、血管（循环系）疾病)Q95-33(动物学的研究与实验)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 603-606 )
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