含P6A寡肽血液的HPLC分离分析
徐友宣
王超
彭师奇
赵明
1.北京大学药学院,北京,1000832.北京大学药学院,北京,1000833.北京大学药学院,北京,1000834.北京大学药学院,北京,100083
摘要：目的:建立可用于寡肽血液浓度测定并可与ESI-MS对接的HPLC方法.方法:以ARPAK溶栓寡肽为模型化合物,考察其对色谱系统的稳定性,选择适宜的洗脱系统,消除寡肽与血浆蛋白的相互作用,确定柱温与寡肽峰面积及保留时间的关系,寻找血液中寡肽降解酶抑制剂,比较不同的填料对从血液中提取寡肽的影响,优化寡肽柱前衍生化的温度、时间、pH环境和试剂.结果:含ARPAK的小鼠血浆在50℃、pH 8.5的条件下与丹酰氯反应70min,衍生化程度可达峰值.含ARPAK的血浆溶液丹酰氯衍生化后用HClO4处理,可以有效地使被测的丹酰氯衍生化的ARPAK从蛋白中游离.pH 9.4的磷酸盐缓冲溶液可以有效地阻滞ARPAK在任意时刻的降解.采用自装的XAD-2柱,可以定量从鼠血浆中回收ARPAK.ARPAK在A相为pH 2.1磷酸盐缓冲液,B相为乙腈的流动相中显示最佳的分离度.室温进样,20%A:80%B至45%A:55%B,10min;45%A:55%B至70%A:30%B,1min,丹酰氯衍生化ARPAK的保留时间为11.77min,检测限为10ng.结论:上述HPLC条件以及样品前处理方法可用于寡肽血样HPLC/ESI-MS研究.
关键词：ARPAK荧光衍生化HPLC分析
分类号：R927.1(药典、药方集（处方集）、药物鉴定)
资助基金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(G1998051111)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 548-553 )
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