两种重组菌中融合蛋白Fv-LDP含量测定方法的比较研究
高瑞娟
赵春燕
王玉凤
炼润梅
李电东
1.中国医学科学院,北京协和医学院,医药生物技术研究所,北京,1000502.中国医学科学院,北京协和医学院,医药生物技术研究所,北京,1000503.中国医学科学院,北京协和医学院,医药生物技术研究所,北京,1000504.中国医学科学院,北京协和医学院,医药生物技术研究所,北京,1000505.中国医学科学院,北京协和医学院,医药生物技术研究所,北京,100050
摘要：目的:测定抗Ⅳ型胶原酶单链抗体Fv和力达霉素辅基蛋白LDP在大肠杆菌中表达产生的融合蛋白Fv-LDP含量.方法:摇瓶培养融合蛋白Fv-LDP表达菌,固定化金属亲和层析纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,HPLC测其纯度.比色法测定菌体浓度,SDS-PAGE分离蛋白带,积分密度扫描法测定融合蛋白Fv-LDP表达百分比和含量.结果:在88.7～1 064 mg·L~(-1)范围内,融合蛋白Fv-LDP浓度和积分密度值呈线性关系(r=0.998 8),精密度RSD为2.09%(n=8),平均回收率为95.18%.结论:SDS-PAGE-SpotDenso法操作简单,重复性好,灵敏度高,适用于发酵过程中对融合蛋白Fv-LDP表达产量的控制分析.
关键词：单链抗体力达霉素辅基蛋白积分密度扫描法含量发酵
分类号：R927.2(药典、药方集（处方集）、药物鉴定)
资助基金：重大新药创制"科技重大专项(2009ZX09103-136)国家自然科学基金(30400503)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 280-283,331 )
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