抗紫杉醇单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
赵凯1
孙立新2
孙宇石3
周东坡1
1.黑龙江大学生命科学学院,微生物黑龙江省高校重点实验室,哈尔滨150080;农业微生物技术教育部工程研究中心,哈尔滨1505002.黑龙江大学校医院,哈尔滨,1500803.黑龙江大学生命科学学院,微生物黑龙江省高校重点实验室,哈尔滨150080
摘要：目的:制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接ELISA检测方法.方法:用琥珀酸酐法将紫杉醇(taxol)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制成全抗原taxol-BSA,采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗原进行鉴定；以taxol-BSA免疫Blab/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/O进行融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定；用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水.同时,对间接ELISA法反应条件进行了优化.结果:获得了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为taxol-A1,taxol-A2和taxol-A3；taxol-A3株腹水效价为1:128 000,属于IgG2b亚型；建立的间接ELISA法检测条件为15 μg· mL-1抗原、4℃包被过夜、1％ BSA封闭lh,PBS做抗体稀释液,单抗反应时间为30 min,酶标二抗作用时间lh,10％浓硫酸终止反应.结论:获得了特异性的抗紫杉醇单克隆抗体并建立了间接ELISA检测方法.本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接ELISA检测方法,为从内生真菌生物合成紫杉醇发酵液中迅速、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定了基础.
关键词：紫杉醇内生真菌taxol-BSA抗紫杉醇单克隆抗体酶联免疫吸附试验
分类号：R979.1(药品)
资助基金：国家自然科学基金(30970090)黑龙江省普通高等学校新世纪优秀人才培养计划(1251-NCET-005;2010RFQXS043)黑龙江大学高层次人才创新团队支持计划(Hdtd 2010-17)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息