戊型肝炎病毒多拷贝分泌表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达
郭敏
雷清
刘晓
蒋琳
1.兰州生物制品研究所有限责任公司,甘肃省疫苗工程技术研究中心,兰州7300462.兰州生物制品研究所有限责任公司,甘肃省疫苗工程技术研究中心,兰州7300463.兰州生物制品研究所有限责任公司,甘肃省疫苗工程技术研究中心,兰州7300464.兰州生物制品研究所有限责任公司,甘肃省疫苗工程技术研究中心,兰州730046
摘要：目的:将胞内表达载体pAO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株.方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660拼接后插入去磷酸化的pAO815载体,得到分泌型表达重组质粒α-ORF2128-660/pAO815(单拷贝),然后将BamH Ⅰ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-α-ORF2128-660)插入到去磷酸化的重组质粒α-ORF2128-660/pAO815中,得到2(AOX-α-ORF2128-660)/pAO815(2拷贝),电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导,SDS-PAGE分析不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性.结果:α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660已克隆入表达载体中,目的蛋白分泌至诱导液上清中,相对分子质量约为59 000,与阴性对照比,单拷贝、2拷贝转化子表达的产物均有生物活性但表达水平无区别.结论:成功改建成分泌型表达载体,构建了多拷贝重组表达质粒,并且成功表达了目的蛋白,为利用改造的pAO815载体表达其他蛋白奠定了基础.
关键词：戊型肝炎病毒重叠PCR多拷贝表达盒毕赤酵母pAO815载体胞内表达载体分泌型表达载体
分类号：R969.4(药理学)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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