人源抗BLyS单链抗体的筛选及其构建与表达
钱尼良1
张晶2
高柳村2
万德有2
冯红茹2
刘蕴慧2
杨懿1
高新2
宋海峰1
1.安徽医科大学,合肥230032;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京1008502.军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850
摘要：目的:从人源单链抗体库中筛选抗B细胞刺激因子(BLyS)的单链抗体基因、构建表达载体并实现单链抗体的表达.方法:以哺乳动物细胞展示型人源ScFv抗体库为起始文库,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例为0.1％的阳性细胞.从候选细胞中提取质粒并转化至DH5α中进行扩增,得到质粒转染293T细胞作为下一轮筛选所需的抗体库.经过依次降低抗原浓度进行了3轮分选得到2个候选的ScFv序列.经序列分析,选择其中一种单链抗体基因,利用基因工程技术构建分泌型表达质粒,转染293E细胞并通过镍亲和层析纯化获得B-10 ScFv抗体蛋白并通过FortieBio Octet QK进行亲和力分析.结果:经过3轮筛选获得了全新的抗BLyS ScFv抗体序列,成功构建并表达了anti-BlyS ScFv抗体蛋白,该单链抗体与的BLyS亲和常数为3.08 nmol·L-1.结论:从哺乳动物细胞展示型人源ScFv抗体库中成功获得了可结合BLyS的全新单链抗体基因序列,该单链抗体与BLyS具有较高的亲和力,这为后续的活性研究以及产品开发奠定了基础.
关键词：B细胞B细胞刺激因子哺乳动物细胞展示型人源ScFv抗体库单链抗体
分类号：R979.6(药品)
资助基金：国家自然科学基金(81272701)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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