体外与体内肝细胞微核检测方法研究
文海若
宋捷
陈高峰
齐乃松
李琛
耿兴超
王雪
1.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京1001762.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京1001763.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京1001764.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京1001765.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京1001766.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京1001767.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京100176
摘要：目的:分别利用遗传毒性阳性剂开展体外微核细胞组学和SD大鼠体内肝细胞微核试验,对2种评价方法进行探讨.方法:①体外肝细胞微核细胞组学:在无S9代谢活化条件下使用不同浓度环磷酰胺(CPA,10或40 μg· mL-1)或丝裂霉素C(MMC,0.05,0.1或0.2 μg·mL-1)与HepaRG或HepG2细胞作用4或24 h,开展胞质分裂阻滞法微核细胞组学试验.计算每个剂量胞质分裂增殖指数(CBPI)和复制指数(RI)、坏死(Nec)和凋亡(Apop)细胞的千分率以及双核细胞中微核(MN)、核芽(NBUD)和核质桥(NPB)出现的千分率.②体内骨髓微核与肝微核试验:使用6～7周龄SD大鼠,连续3d分别在0,24和45 h经口灌胃ddH2O,CPA(10,20或40 mg· kg-1)或EMS(200 mg· kg-).末次给药后取单侧股骨和肝左叶中间约5 mm3大小组织分别制作骨髓和肝细胞微核涂片.镜检计数每组动物的嗜多染红细胞微核率(MNPCE‰o)和肝细胞微核率(LMN‰)的平均值与标准差.结果:①HepaRG细胞经CPA或MMC处理可见MN‰,NBUD‰及NPB‰呈剂量相关性增加,中高剂量组与对照组比较有显著差异(P＜0.05或P＜0.01);HepG2细胞NBUD‰和NPB‰背景值较高,在高背景值的基础上经CPA或MMC处理均见统计学意义上的显著增加,且增加幅度较大(P＜0.01);MMC处理组以上2项指标的增幅较CPA处理组更显著.NPB‰不是HepG2细胞的染色体损伤敏感指标.②连续3d经口灌胃CPA或EMS均可引起SD大鼠MNPCE‰和LMN‰升高.结论:利用HepaRG开展体外微核细胞组学,可在不添加S9的条件下经阳性剂CPA或MMC处理4h获得阳性结果,是开展体外肝细胞微核试验的理想研究对象.体内肝细胞微核实验的敏感性和特异性较好,该方法与SD大鼠重复给药毒性实验结合,可对药物肝毒和遗传毒性进行综合预测.
关键词：HepaRGHepG2微核细胞组学胞质分裂阻滞微核肝微核
分类号：R994(毒物学（毒理学）)
资助基金：中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金课题(2014C1)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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