人间充质干细胞体外成软骨分化能力综合评价策略研究
张可华
刘静
纳涛
袁宝珠
1.中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心,北京,1000502.中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心,北京,1000503.中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心,北京,1000504.中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心,北京,100050
摘要：目的:探索人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)成软骨细胞诱导分化能力评价技术和评价策略,为hMSCs生物学有效性体外评价提供方法学参考.方法:高密度体外接种hMSCs,促使其形成软骨样3D微球结构,并在此基础上对其成软骨细胞诱导分化能力进行评价.评价内容有:①微球的自发形成能力以及成软骨诱导分化过程中外观形态学分析.②以阿辛蓝及番红O染色为基础的组织结构分析,用于软骨细胞外基质形成能力分析.③通过Real-time PCR对软骨细胞特定基因(ACAN,COL1A2,COL2A1,COL1OA1和MIA)表达水平的分析.在对以上评价结果综合分析和软骨组织学方法验证的基础上,对hMSCs体外成软骨细胞诱导分化能力进行综合准确评价.结果:具备软骨细胞诱导分化能力的hMSCs可表现为:①具有自发形成软骨样细胞微球能力,并在诱导分化过程中形成白色光滑致密软骨样结构,阿辛蓝染色呈深蓝色.②组织学上可观察到细胞微球外周呈同心圆排列的软骨细胞外基质层.(③成软骨诱导分化过程中软骨细胞特定基因表达显著上调.不同hMSCs在上述三方面的综合特性上存在较大差异.结论:对hMSCs成软骨细胞诱导分化过程中的形态学、组织学和特定基因表达水平的检测较单一方法的检测能够更加客观准确地评价hMSCs的成软骨细胞分化能力.
关键词：间充质干细胞质量评价生物学有效性诱导分化
分类号：R977.9(药品)
资助基金：国家重点研发计划(2016YFA0101500)广东省省级科技计划(2014B020226002)广州市干细胞技术临床转化基地建设干细胞与再生医学技术创新与临床应用(201508020262)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 2196-2203 )
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