食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度检测方法的开发及验证
孙晓卉
满素勤
陈亚会
陈巨冰
朱晰
赵小平
程远国
马璟
1.中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心,上海201203;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海2012032.中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心,上海201203;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海2012033.中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心,上海201203;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海2012034.中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心,上海201203;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海2012035.中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心,上海201203;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海2012036.中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心,上海201203;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海2012037.中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心,上海201203;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海2012038.中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心,上海201203;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海201203
摘要：目的:建立并验证检测食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)方法.方法:游离IgE和总IgE浓度的检测均采用夹心法.采用FcεRI作为捕获试剂,并采用生物素标记的抗IgE多抗作为检测试剂进行游离IgE浓度的测定;对于总IgE的检测,捕获和检测试剂均为抗IgE多抗.该研究对检测方法的关键参数进行了优化并对该方法进行定量范围、精密度、准确度、回收率、稳定性、方法特异性、药物干扰试验等方面的方法学验证.结果:游离IgE和总IgE的定量范围均在6.25 ～400 ng·mL-1,标准曲线样品复孔间变异(精密度,coefficient of variation,CV％)不超过20％,其中定量上限(upper limit of quantitation,ULOQ)和定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ)不超过25％.相对偏差(relative deviation,RE％)不超过±20％,ULOQ和LLOQ不超过±25％.游离IgE检测方法的批内、批间精密度分别在0.87％ ～9.15％和4.27％～6.50％;检测总IgE方法的批内、批间精密度分别在0.92％～11.60％和7.21％ ～ 17.89％;游离IgE的回收率在76.53％～88.85％;总IgE的回收率分别在72.77％ ～ 86.93％.干扰试验结果表明,奥马珠单抗不影响总IgE的回收率水平.然而在游离IgE检测中,奥马珠单抗浓度的升高可以显著降低游离IgE的回收率水平.结论:本研究建立的食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的检测方法,可用于食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度测定,为抗IgE抗体的临床前评价提供重要的数据支持.
关键词：IgE奥马珠单抗酶联免疫吸附试验方法学验证
分类号：R99(毒物学（毒理学）)
资助基金：重大新药创制"科技重大专项(2018ZX09201017-008)上海市科委工程技术研究中心(17DZ2252900)上海市扬帆计划(16YF1411300)
论文发表日期：2020-01-15
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 42-47 )
英文信息