以PDE2为靶标的抑制剂药物高通量筛选模型的建立
许煌1
许晓双2
高英1
曹依菁1
黄险峰1
孔韧2
宋国强1
1.常州大学制药与生命科学学院,常州2130012.江苏理工学院电气信息工程学院生物信息与医药工程研究所,常州213001
摘要：目的:建立稳定可靠,且以二型磷酸二酯酶(PDE2)为靶标,采用AlphaScreen(R) cAMP kit为技术的高通量药物筛选模型.方法:利用大肠杆菌原核表达纯化获得目的蛋白,通过AlphaScreen酶活体系摸索MgCl2浓度对PDE2活性影响,测定底物Bio-cAMP的Km值,考察二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对体系的影响,最后测定阳性抑制剂Bay 60-7550的半抑制浓度(IC50)验证模型.结果:纯化的PDE2蛋白通过SDS-PAGE检测分子量约为40.0 kD,测得浓度1.2 mg·mL-1;反应缓冲液中MgCl2浓度定为10 mmol·L-1,结合米氏方程,测得Km后确定底物工作浓度为200 nmol·L-1,PDE2工作浓度为0.12 mg· mL-1;体系DMSO含量需低于4％;通过以上条件测得Bay 60-7550的IC50值为8.4 nmol· L-1,与文献值近似.结论:建立的高通量筛选模型,具备易于操作、信号窗口大、速度快、节省原料等特点,可用于PDE2抑制剂筛选.
关键词：二型磷酸二酯酶AlphaScreen抑制剂高通量筛选
分类号：R914(药物基础科学)
资助基金：国家自然科学基金(81603152)江苏省研究生科研与实践创新计划项目(SJCX19_0631)
论文发表日期：2020-05-31
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1175-1180 )
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