重组Arg34-GLP-1[7-37]杂质的分离纯化及质谱解析
梁涛
高婷
李进军
赵晨
葛燕
李端华
王辂
成都大学四川抗菌素工业研究所,成都610052
摘要：目的:对重组Arg34-胰高血糖素样肽-1(Arg34-Glucagon-like Peptide-1[7-37],Arg34-GLP-1[7-37])生产制备过程中的潜在杂质进行分离纯化和结构确证.方法:将发酵后的料液进行高效液相色谱分析检测,利用离子交换色谱和制备液相纯化得到Arg34-GLP-1[7-37]纯品和杂质组分,使用纯品进行高温、酸碱等不同条件下的破坏实验,来探知杂质产生机理,利用MALDI-TOF质谱、蛋白质全序列测序等方式推断杂质的分子量与结构.结果:经阴离子交换色谱及反相制备纯化后,Arg34-GLP-1[7-37]的纯度可达97.9％.分离出3种主要杂质并将其纯化至91.4％,99.2％和96.7％.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF)测试其[M+H]+分子量分别为1 033.544 6,2 744.239 7和3 112.447 5,通过破坏实验及Arg34-GLP-1[7-37]的氨基酸序列来推测杂质1、杂质3与杂质9可能序列分别为E-F-I-A-W-L-V-R,H-A-E-G-T-F-T-S-D-V-S-S-Y-L-E-G-Q-A-A-K-E-F-I-A-W,H-A-E-G-T-F-T-S-D-V-S-S-Y-L-E-G-Q-A-A-K-E-F-I-A-W-L-V-R.将纯化前后的成分进行比对,表明上述3个主要杂质是由发酵过程产生,通过极端条件处理这些杂质,其含量会显著增加.本研究解析的3个杂质结构及机理探究均为首次发表.结论:由于重组Arg34-GLP-1[7-37]在高温、过酸过碱及氧化环境中不稳定,为防止纯化过程中主产物降解,应注意避免这些条件.本研究为胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide1,GLP-1)及其类似物的研究指出了一些应避免的误区.
关键词：杂质谱重组Arg34-GLP-1[7-37]多肽纯化高分辨质谱
分类号：R917(药物分析)
资助基金：国家国际科技合作专项基金(20GJHZ0211)成都市科技局项目(2016-XT00-00023-GX)国际科技创新合作资助项目(2020YFH0013)
论文发表日期：2021-03-31
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 562-568 )
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