CHO宿主细胞蛋白残留量检测方法适用性验证
张峰1
秦俭2
郭莎1
王兰1
1.中国食品药品检定研究院,北京1026292.依科赛生物科技(太仓)有限公司,太仓215434
摘要：目的:对CHO宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量检测方法应用于候选治疗性单克隆抗体(以下简称单抗)产品生产过程中质控和放行检测的适用性进行验证.方法:采用荧光标记的二维差异凝胶电泳(2-dimensional difference gel electrophoresis,2D-DIGE)测定羊抗HCP多克隆抗体对空发酵宿主细胞上清中HCP蛋白的覆盖率;采用统计学方法根据40次检测结果确定检出限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantitation,LOQ);依照人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)Q2要求验证方法特异性、精密性/中间精密性、准确性、线性和耐受性;依照《美国药典》〈1132〉要求验证方法用于过程中质控的适用性、关键HCP清除步骤和各步骤样品测定稀释度范围.结果:2 D-DIGE测定羊抗HCP多抗对CHO HCP的覆盖率为56％,应用该抗体建立的CHO HCP检测方法的LOD和LOQ分别为2.47和7.41 ng·mL-1.经验证,方法特异性、精密性/中间精密性、准确性、线性和耐受性均符合要求.系列稀释单抗纯化过程中间产物,采用选定方法进行检测,确定各生产步骤产物HCP测定的稀释范围,计算各纯化步骤的HCP清除率,确定蛋白A亲和层析为HCP的主要清除步骤.根据上述结果,确定所选定的CHO HCP残留量测定方法可做为蛋白A纯化的过程中控制项目和原液的放行项目.结论:所选定CHO HCP检测方法可应用于候选治疗性单抗的过程中控制和放行.
关键词：宿主细胞蛋白残留量检测验证覆盖率单克隆抗体
分类号：R917(药物分析)
资助基金：重大新药创制"科技重大专项(2018ZX0901001-003)
论文发表日期：2021-11-15
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 1967-1974 )
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