抗GPC3/NKG2 D双特异性融合蛋白的制备及其功能研究
刘蕴慧1
葛晨2
徐勤枝3
钱尼良3
杨慧4
万令飞2
阎新龙2
高新3
1.北京工业大学环境与生命学部,北京100124;北京免疫方舟医药科技有限公司,北京1000712.北京工业大学环境与生命学部,北京1001243.北京免疫方舟医药科技有限公司,北京1000714.军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所军事再生医学研究室,北京100850
摘要：目的:构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)和NKG2D的双特异性融合蛋白,并初步评价其在体外对肝癌细胞的杀伤功能.方法:通过基因工程技术,将NKG2 D的配体人主要组织相容性复合物Ⅰ类相关蛋白A(MHC classⅠchain-related A,MICA)胞外区融合到Fab形式的抗人GPC3抗体GC33的重链末端,构建双特异性融合蛋白(Fab GC33-MICA,FabGM)表达载体;转染FreeStyleTM 293-F细胞,收集细胞培养上清,经亲和纯化获得FabGM蛋白;利用分子相互作用技术(Fortebio)和流式细胞术检测FabGM的靶向亲和力;细胞实时动态成像分析系统测定FabGM介导的外周血单个核细胞(PBMCs)对高表达GPC3的人肝癌细胞HepG2的杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBMCs分泌人干扰素-γ(hIFN-γ)情况.结果:本研究成功地表达并纯化了FabGM,明确FabGM可特异性结合GPC3和NKG2D.经检测FabGM能有效介导PBMCs靶向杀伤HepG2肝癌细胞,诱导PBMCs分泌IFN-γ.结论:双特异性融合蛋白FabGM能够在体外有效介导效应细胞PBMCs杀伤肝癌细胞HepG2,为FabGM成为肝细胞肝癌的潜在靶向治疗药物提供了实验依据.
关键词：双特异性融合蛋白双特异性抗体肝细胞肝癌磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3NKG2D
分类号：R979.1(药品)
资助基金：国家自然科学基金(81772617)北京市长城学者计划(CIT&TCD20190311)
论文发表日期：2021-11-15
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1975-1981 )
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