槟榔碱对大鼠体外胚胎肢芽发育的影响
朱思睿1
杨艳伟2
赵曼曼2
刘鑫磊2
黄芝瑛3
周晓冰2
张河战2
李波2
1.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京100176;中山大学药学院,广州5100062.中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京1001763.中山大学药学院,广州510006
摘要：目的:研究槟榔碱在体外培养下对大鼠胚胎软骨发育的影响,从而探究槟榔碱的胚胎致畸性.方法:取受孕d 14大鼠胚胎肢芽,前肢芽利用微团培养技术进行体外培养,根据半数细胞增殖抑制浓度(IC50-P)和半数细胞分化抑制浓度(IC50-D)及其比值判定受试物的致畸性;利用离体器官技术培养后肢芽,随机分为空白对照(0 mg·mL-1槟榔碱)、低剂量(0.1 mg·mL-1槟榔碱)、中剂量(1 mg·mL-1槟榔碱)、高剂量(10 mg·mL-1槟榔碱)、阳性对照(100 ng·mL-15-氟尿嘧啶)5个实验组,分别在体外培养24,72和120 h后收获,在体视镜下进行形态学评分后,石蜡包埋、切片、HE染色和甲苯胺蓝染色观察细胞和软骨形态,并通过免疫组化技术研究槟榔碱对在各组软骨细胞骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达的影响.结果:在微团模型中根据欧洲替代方法验证中心(European Centre for the Validation of Alternative Methods,ECVAM)预测模型判定槟榔碱为胚胎中晚期发育毒性化学物,为非特异性弱致畸物;在整体肢芽器官模型中,1 mg·mL-1(中剂量)及以上浓度的槟榔碱会对肢芽器官造成发育毒性,10 mg·mL-1(高剂量)从给药24 h后便能产生显著毒性,各剂量组在72 h培养后发育状况出现了显著的剂量相关性;从病理切片结果可以看出,槟榔碱会进一步影响增殖软骨细胞和肥大软骨细胞的增殖分化,从而影响肢芽指掌与肢臂的发育;在BMP-2表达的免疫组化结果中,BMP-2的表达强度呈现与槟榔碱剂量相关性,槟榔碱的剂量越大,阳性表达程度越低,反映软骨细胞增殖分化放缓.结论:大于1 mg·mL-1的槟榔碱在大鼠胚胎肢芽体外培养中有生长抑制作用,可初步认为槟榔碱对胚胎中后期发育具有弱致畸性,可能是通过影响BMP-2的表达来抑制软骨细胞的增殖分化.
关键词：槟榔碱胚胎毒性致畸替代实验微团培养离体器官培养
分类号：R965(药理学)
资助基金：重大新药创制"科技重大专项(2018ZX09201017-001)国家自然科学基金(81603210)中检院中青年基金(2020C1)
论文发表日期：2021-12-15
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 2157-2165 )
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