基于报告基因的抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性测定方法建立
李娜
吴振华
梅小芬
柳颖
陈瑶
陈娟
蒋美珠
王海彬
浙江博锐生物制药有限公司,台州318000
摘要：目的:建立抗CD3×GPRC5D双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)生物学活性的报告基因测定方法.方法:构建Jurkat/NFAT-Luc转基因细胞株作为效应细胞,MM.1R细胞系作为靶细胞,建立和优化抗CD3×GPRC5 D双特异性抗体生物学活性检测方法并进行方法学验证.分别用优化后的报告基因法和PBMC杀伤试验评价不同类型的抗CD3×GPRC5 D双特异性抗体生物学活性.结果:报告基因法优化后确定靶细胞为MM.1R细胞,细胞铺板密度为2×104个·孔-1,效靶比1:1,抗体起始浓度为20μg·mL-1,2倍稀释1次后,再6倍梯度稀释,共10个浓度点,诱导时间6 h.方法 验证结果说明该方法具有良好的专属性,制备50％,75％,100％,150％和200％理论效价样品,进行准确性、精密度和线性验证,结果显示生物学活性回收率在97.85％ ～106.51％,变异系数均<10％;相对效价理论值与实测值直线回归分析相关系数为0.9978.同时,该方法适用于各类抗CD3×GPRC5 D双特异性抗体,均有较好的剂量反应曲线,且与PBMC杀伤试验结果具有较好的一致性.结论:本研究成功建立抗CD3×GPRC5 D双特异性抗体生物学活性的报告基因检测方法,该方法具有较高的准确性和精密度,且特异性良好,可作为此类双特异性抗体活性评价的常规方法.
关键词：抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性报告基因法
分类号：R927(药典、药方集（处方集）、药物鉴定)
论文发表日期：2022-08-15
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1474-1479 )
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