猴血浆中抗腺相关病毒8中和抗体滴度检测方法的建立及初步确认
陶泽萍1
曹艳容2
许波华3
周璐4
赵小平5
1.上海工程技术大学化学化工学院,上海 201620;上海益诺思生物技术股份有限公司,上海 201203;益诺思生物技术南通有限公司,海门 2261332.上海天泽云泰生物医药有限公司,上海 2012103.益诺思生物技术南通有限公司,海门 2261334.上海益诺思生物技术股份有限公司,上海 2012035.上海工程技术大学化学化工学院,上海 201620;上海天泽云泰生物医药有限公司,上海 201210
摘要：目的:建立一种基于细胞平台的高灵敏度、高效、稳定的猴血浆中抗腺相关病毒 8(AAV8)中和抗体滴度的检测方法,并对该方法进行相关性能的初步确认.方法:在体外将等体积稀释后的猴血浆与AAV8-Luciferase孵育后,取混合液加入铺有HEK293 细胞的96 孔板中,孵育过夜以感染HEK293 细胞;细胞裂解后加入萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂,使用酶标仪检测荧光信号(RLU),以评估血浆中抗AAV8 中和抗体含量,继而得到相应的抗体滴度.该研究对检测方法的检测灵敏度(LOD)及滴度实验重复性、精密度、方法稳健性和样品稳定性等性能进行初步确认.结果:建立了高灵敏度、高效、稳定的细胞水平检测猴血浆中抗AAV8 中和抗体滴度的方法并完成初步确认.该方法LOD值为10.36 ng·mL-1,滴度实验重复性、精密度及方法稳健性良好,阳性对照样品室温放置24h、2℃～8℃放置24h、经-65℃～-90℃/室温冻融6次均保持稳定.结论:经初步确认,该方法可以用于猴血浆中抗AAV8 中和抗体滴度的分析检测,利于掌握药物治疗进程,及时调整治疗方案,对AAV8 血清型基因治疗药物的研发及个体化治疗有一定提示作用.
关键词：VGB-R04中和抗体细胞水平方法学验证
分类号：R917(药物分析)
资助基金：上海市科委工程技术研究中心专项基金资助项目(17DZ2252900)
论文发表日期：2023-08-31
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1622-1628 )
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