促红素N-糖链的超高压液相色谱分析方法验证
李响
秦玺
裴德宁
于雷
史新昌
周勇
中国食品药品检定研究院,国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 100050
摘要：目的:应用超高压液相色谱方法对促红素N-糖链分析并进行方法学验证,为相应质控方法的建立和验证提供参考.方法:用N-糖苷酶将促红素N-糖链酶切下后,进行2-AB衍生化标记,采用磁珠法纯化后进行液相分析,以pH 4.4的100 mmol·L-1甲酸铵溶液为流动相A液,70％乙腈为流动相B液,梯度洗脱70.0 min,荧光检测器检测,激发光波长260 nm、发射光波长430 nm.对该方法进行了相应的方法学验证.结果:考察了方法进样和制备重复性,峰簇1～5的峰面积百分比的RSD不高于4.08％,保留时间的RSD均不高于2.89％.方法 中间精密度考察结果显示,峰簇1～5的峰面积百分比的RSD不高于11.85％,保留时间的RSD均不高于8.05％.方法准确度考察中,峰簇2,3,4相对峰面积回收率分别为98.28％～113.01％,98.68％～102.96％,98.51％～100.75％.在蛋白含量为 2.5～7.5 mg·mL-1(即促红素蛋白量50～150 µg)时,峰簇1～5峰面积线性回归的决定系数均＞0.99.设定方法定量限为蛋白量50 μg,所制备的样品4℃放置48h内稳定.结论:实验结果显示该方法的专属性、精密度、准确度和线性均良好,可为促红素N-糖质控方法的建立和验证提供参考.
关键词：N-糖链促红素方法学验证2-AB标记质量控制
分类号：R917(药物分析)
资助基金：国家质量基础的共性技术研究与应用专项(2021YFFO600804)
论文发表日期：2024-03-31
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 598-604 )
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