报告基因法测定重组人白细胞介素-2产品生物学活性的研究
段茂芹1
郭莹2
罗倩倩3
于传飞1
付志浩1
徐纲领1
王兰1
1.中国食品药品检定研究院单克隆抗体室,北京 1026292.中国食品药品检定研究院重组药物室,北京 1000503.广州市药品检验所,广州 510160
摘要：目的:建立测定重组人白介素-2(recombinant human interleukin-2,rhIL-2)制品生物学活性的报告基因法(reporter gene assay,RGA).方法:根据ICH Q2 和《中华人民共和国药典》2020 年版指导原则,构建慢病毒转染表达荧光素酶(luciferase,Luc)的C8166 细胞,进行rhIL-2 生物学活性测定方法学优化与验证,优化内容包括孵育时间、细胞数量、待测样品的初始浓度和稀释比例;验证内容包括特异性、线性和准确性、精密度和耐用性.结果:优化后的检测条件为:孵育时间为 24 h;细胞接种密度为 1×105 细胞·孔-1;待测样品以10 000 IU·mL-1为起始浓度1∶3稀释10 个梯度.荧光信号值强度与待测样品浓度拟合四参数曲线,计算相对效价.选用不同作用类型的细胞因子进行特异性验证均符合应用要求.采用 50%,75%,100%,125%和150%的 5 个浓度点验证线性和部分准确性,实测与理论效价线性回归分析相关系数R2 = 0.993 1,各浓度点的回收率均在80%～120%之间.标准品和供试品按5 个不同的比例进行混合,测定供试品的加标回收率均在84%～111%之间,均符合质量控制要求.精密度验证主要考察日内和日间精密度及不同人员的重复性,日内、日间的精密度和不同人员之间的重复性相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<10%.选取第5,26 和78 代次的细胞测定荧光信号值,信噪比(S/N)无统计学差异,表明不同代次细胞均可达到检测要求.结论:建立的rhIL-2 生物学活性RGA方法适用性强,可应用于质量控制放行检测中.
关键词：重组人白介素-2生物学活性报告基因优化与验证
分类号：R917(药物分析)
资助基金：中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金资助项目(2020B2)
论文发表日期：2024-04-15
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 654-661 )
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